流感病毒H5N1亞型核酸檢測試劑盒(熒光PCR法)

對樣本中流感病毒H5N1亞型RNA進(jìn)行檢測,適用于流感病毒H5N1型感染的輔助診斷及流行病學(xué)調(diào)查。

  • 產(chǎn)品品牌: REAGEN
  • 產(chǎn)品貨號: RN065FP
  • 產(chǎn)品規(guī)格: 50/100T
  • 產(chǎn)品適用: 對樣本中流感病毒H5N1亞型RNA進(jìn)行檢測,適用于流感病毒H5N1型感染的輔助診斷及流行病學(xué)調(diào)查。
  • 產(chǎn)地來源: 深圳
  • 保質(zhì)期: 12個月

【產(chǎn)品名稱】

通用名稱:流感病毒H5N1亞型核酸檢測試劑盒(熒光PCR)

【包裝規(guī)格】

50人份/

【預(yù)期用途】

對樣本中流感病毒H5N1亞型RNA進(jìn)行檢測,適用于流感病毒H5N1型感染的輔助診斷及流行病學(xué)調(diào)查。

【檢驗(yàn)原理】

本試劑盒采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)結(jié)合Taqman技術(shù),對禽流感病毒H5N1亞型的特異性核酸片段進(jìn)行熒光PCR檢測。

【主要成分】

 

組分成分

50人份/

主要成分

規(guī)格

數(shù)量

 

 

PCR反應(yīng)液

 

 

884μL /

 

1

引物、探針、脫氧核糖核苷三磷酸(dNTP)、緩沖體系

 

酶混合液

156μL /

1

Taq酶、MMLV

陽性對照

200μL /

1

含目的片段的質(zhì)粒

陰性對照

500μL /

1

無核酸酶水

 

【儲存條件及有效期】

試劑置于-30~-15避光保存,有效期為12個月。本產(chǎn)品反復(fù)凍融應(yīng)不超過5。

【適用儀器】

熒光定量PCR儀:ABI 7500熒光PCR.;ABI Quantstudio5 ;Gentier 96RSLAN-96P全自動醫(yī)用PCR分析系統(tǒng)。

【樣本要求】

1. 適用樣本

咽拭子:應(yīng)使用專用采樣拭子,適度拭抹咽后壁和兩側(cè)扁桃體部位;迅速將拭子放入標(biāo)本采集管中,旋緊管蓋并密封,以防干燥。                                      

全血:疑似感染動物的靜脈血2mLEDTA-2Na抗凝管,8000rpm離心2min,取適量上清液于1.5mL滅菌離心管中。

2. 樣本運(yùn)輸和保存

上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃,長期保存可置-70,但不能超過6個月,標(biāo)本運(yùn)送應(yīng)采用2~8℃冰袋運(yùn)輸,嚴(yán)禁反復(fù)凍融。

 【檢驗(yàn)方法】

1. 樣本處理

取待測樣本200ul,按照核酸提取試劑盒說明書進(jìn)行核酸提取。

2. 試劑配置(在準(zhǔn)備區(qū)進(jìn)行,與擴(kuò)增區(qū)分開,冰上操作

注:試劑使用前要完全解凍,使用前渦旋混勻,10000 rpm離心5 s,確保試劑完全離心至管底,否則會出現(xiàn)裝量差異的現(xiàn)象。若有N個待檢測樣本,則需配置N+2擴(kuò)增反應(yīng)(待檢樣本數(shù)N+1個陽性質(zhì)控品+1個陰性質(zhì)控品,按下表要求進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)液的配制,配制完成后充分震蕩混勻,10000 rpm離心5 s。按每管20μL分裝至0.2 ml PCR管中,并做好標(biāo)記,擴(kuò)增反應(yīng)液需現(xiàn)配現(xiàn)用。


N人份(μL)

PCR反應(yīng)液

N+2×17

酶混合液

N+2×3

總量

N+2×20

3. 加樣在樣品處理區(qū)進(jìn)行,冰上操作

按陰性質(zhì)控品、待測樣品、陽性質(zhì)控品的加樣順序,分別取5μL,加入至已分裝擴(kuò)增反應(yīng)液的八聯(lián)管中,反應(yīng)總體系為25μL。蓋緊管蓋,短暫離心后置于熒光定量PCR儀中,并記錄樣本擺放順序。

4. 擴(kuò)增反應(yīng)(在擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行

選擇FAM通道檢測H5亞型,選擇HEX通道檢測N1亞型。按以下擴(kuò)增程序表設(shè)置PCR擴(kuò)增參數(shù)。

步驟

溫度

時間

循環(huán)數(shù)

1

逆轉(zhuǎn)錄

50

10min

1

2

預(yù)變性

95

3min

1

3

變性

95

10sec

45cycle

4

退火延伸及熒光檢測

55

30 sec

報(bào)告熒光:FAMHEX;淬滅熒光:NONE。

 5.質(zhì)量控制


FAM通道Ct

HEX通道Ct

陰性對照

UNDET

UNDET

陽性對照

35

35

以上要求需在同一次實(shí)驗(yàn)中同時滿足,否則,本次實(shí)驗(yàn)無效,需重新進(jìn)行

6.結(jié)果判讀

反應(yīng)結(jié)束自動保存結(jié)果,根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié)Baseline Start 值、End 值以及Threshold 值(可以根據(jù)實(shí)際情況自行調(diào)整,Start 值可以在3~15End 值可設(shè)在5~20,調(diào)整陰性對照的擴(kuò)增曲線平直或低于閾值線),點(diǎn)擊Analysis 自動獲得分析結(jié)果,在Report 界面觀看結(jié)果。

試驗(yàn)結(jié)果判斷

FAM通道

HEX通道

Ct>40

Ct值≤40

Ct>40

Ct值≤40

H5亞型陰性

H5亞型陽性

N1亞型陰性

N1亞型

陽性

檢驗(yàn)結(jié)果的解釋

1.實(shí)驗(yàn)室環(huán)境污染,試劑污染,樣品交叉污染會出現(xiàn)假陽性結(jié)果,如陰性對照檢測為陽性,則需做進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)來確認(rèn)是哪類污染。如為試劑污染,需開封新的試劑盒再次進(jìn)行實(shí)驗(yàn);如為樣品交叉污染,應(yīng)重復(fù)實(shí)驗(yàn);如為實(shí)驗(yàn)室環(huán)境污染,需對實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行徹底清潔或更換實(shí)驗(yàn)室再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

2.試劑運(yùn)輸、保存或配制不當(dāng)會引起試劑檢測性能下降,出現(xiàn)假陰性結(jié)果。如陽性對照檢測為陰性,應(yīng)開封新的試劑盒再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

檢測方法的局限性

1. 該試劑盒僅為定性產(chǎn)品,不做定量測定。

2. 當(dāng)樣本的病毒含量低于最低檢出限時,可能會出現(xiàn)假陰性。陰性結(jié)果僅說明提取的核酸濃度低于該試劑盒的檢測極限,但不能完全排除病毒感染的可能。

【產(chǎn)品性能指標(biāo)】

1.準(zhǔn)確性:企業(yè)陽性參考品檢測結(jié)果全部為陽性,陽性率為15/15。

2.最低檢測限:該試劑盒最低檢測限為500copies/mL。


企業(yè)愿景

    公司將一如既往的視誠信為最重要的文化精神;在經(jīng)營決策和管理的全過程中信守“以產(chǎn)品質(zhì)量、優(yōu)質(zhì)服務(wù)”為原則和“為人類健康服務(wù)”為宗旨的理念;融前沿科技、全球資源與優(yōu)質(zhì)人才為資本,以開拓創(chuàng)新、銳意進(jìn)取、精益求精之精神,科學(xué)管理之導(dǎo)向,凝聚員工、客商之合力,同舟共濟(jì),為實(shí)現(xiàn)人類的食品安全和生物醫(yī)藥業(yè)的高速發(fā)展不懈奮斗!

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